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Lj 2 x fast pfu Master Mix 使用說明書

發布時間:2017/11/14      點擊次數:1816

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Lj 2 x fast pfu Master Mix

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Lj 2 x fast pfu Master Mix

D1010L1185

1ml

-20℃

150

李記生物研發的Fast pfu較普通Pfu酶有更高的靈敏度和抗干擾能力,在獲得理想擴增效果的前提下,答復縮短了擴增時間,非常適合1-20kb的長片段擴增。本制品是將PCR反應所需的Fast pfu Taq酶、dNTPs 、MgCL2以及反應提沖液預先配制成2倍濃度的混合物。2 xFast Pfu Master Mix 專為擴增克隆DNA片段優化,高保真,錯誤率僅為1x 10-6,較普通Taq酶低100倍,較普通pfu酶低10倍。使用時只需加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進行PCR反應,大大地簡化了操作過程,減少了PCR操作過程中的污染。

運輸與保存方法

冰袋運輸,收到貨后-20℃避光干燥保存,避免反復凍融,保存條件下1年有效。

使用方法

常用反應體系

常用PCR程序

2 x Lj fast pfu Master Mix上游引物

下游引物

模板

 

ddH2O

25 μL

0.2-1.0μM(終濃度)

0.2-1.0μM(終濃度)

1-50ng(質粒)

10ng-1μg(基因組)

至50μL

擴增片段<3k

擴增片段≥3k

94℃              90sec

          94℃     20s

30次循環  57-60℃  20s

          72℃ 1kb/30s

72℃              5min

4℃               保溫

94℃    

30次循環                

72

4℃       

    5min

94℃  5s

68℃1kb/30s

     5min

    保溫

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

使用建議

Fast pfu DNA 聚合酶產生的PCR產物為平滑末端,無3’端“A”突出。PCR產物克隆方案有:

1)  PCR前引物進行5’端加磷修飾或將PCR產物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中。

2)  將產物3’末端加A后再與T載體鏈接。

3)  由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對活性可引起引物從3’端被部分降解。因此在設計引物時應適當增加引物的長度,理想的引物長度為20-30mers。另外為了減少有3’-5’外切酶活性引起的引物降解,盡量在冰上配制反應體系。

注意事項

1.   需溶解*后使用, 防止離子濃度不均勻。

2.   對高GC含量模板,建議將變性溫度提高到98℃。

3.   對于高GC模板,建議添加終濃度為5%-8%DMSO。

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